Électrophorèse
Définition
L'électrophorèse est une technique de séparation de molécules en fonction de leur mobilité dans un champ électrique. La séparation peut être réalisée sur la surface hydratée d'un support solide (papier ou acétate de cellulose), à travers une matrice poreuse (sur gel), ou en solution (libre).
Schéma de fonctionnement d'une électrophorèse :
L'électrophorèse est une technique de laboratoire utilisée pour séparer les molécules d'ADN, d'ARN ou de protéines en fonction de leur taille et de leur charge électrique. Un courant électrique est utilisé pour déplacer les molécules à séparer à travers un gel. Les pores du gel fonctionnent comme un tamis, permettant aux molécules plus petites de se déplacer plus rapidement que les molécules plus grosses. Les conditions utilisées pendant l'électrophorèse peuvent être ajustées pour séparer les molécules dans une plage de taille souhaitée.
Explications
Une électrophorèse est un mouvement de particules colloïdales à travers un fluide et sous l'action d'un champs électrique, c'est encore un procédé de séparation de biomolécules basé sur leur charge électrique et leur taille. Cette technique est utilisée pour déterminer les phénotypes et génotypes protéiniques. Selon la technique utilisée, la séparation obéit dans une mesure différente à la charge électrique des molécules et à leur masse.
Voir aussi l'électroporation.
L'électrophorèse est utilisée en grande majorité en matière d'ADN recombinant car elle permet de connaître la charge que possèdent les polypeptides et de séparer les différents polypeptides résultant des variations de l'expérience de l'ADN recombinant. Le variant le plus couramment utilisé pour l'analyse de mélanges de protéines ou d'acides nucléiques utilise un gel, généralement de l'agarose ou du polyacrylamide, comme support.
Les acides nucléiques ont déjà une charge électrique négative, qui les dirigera vers le pôle positif, tandis que les protéines se chargent en se liant à des substances telles que le SDS (détergent) qui incorpore des charges négatives d'une manière dépendante de la masse moléculaire de la protéine.
En mettant le mélange de molécules et en appliquant un champ électrique, elles se déplaceront et devraient traverser le maillage du gel (un réseau tridimensionnel de fibres croisées), pour que les petites se déplacent mieux, plus rapidement. Ainsi, le plus petit avancera davantage et le plus grand sera proche du point de départ.
La grande majorité des macromolécules sont chargées électriquement et autres électrolytes, peuvent être classés en forte et faible en fonction de la constante d'ionisation des groupes acides et de base. Par exemple, les acides nucléiques sont des polyacides forts. Voir aussi une immunoélectrophorèse.
En général, pour caractériser la molécule, la vitesse à laquelle elle se déplace dans un champ électrique est déterminée et elle est utilisée pour déterminer, dans le cas des protéines, la masse moléculaire ou pour détecter les changements d'acides aminés et séparer quantitativement différentes espèces moléculaires; dans le cas des acides nucléiques, leur taille est déterminée, mesurée en paires de bases.
Le Northern Blot est une technique de détection de séquence spécifique d'ARN messager d'un oligonucléotide après leur séparation par électrophorèse, par hybridation avec une sonde d'ADN marqué.
Pour séparer différentes espèces, un champ électrique est créé pour la molécule placée dans un liquide porteur. Lors de la génération de ce champ il y aura une intensité passant constamment du pôle positif au pôle négatif, donc une force agira sur la molécule et elle subira une accélération jusqu'à obtenir une vitesse à laquelle la résistance, due à la viscosité du milieu, neutralise la force motrice.
Autrement dit, la molécule se déplace à une vitesse constante. La mobilité dépend de la charge de la particule, qui, à son tour, dépend du pH du milieu dans lequel elle se trouve. Pour cette raison, il est nécessaire d'indiquer l'électrolyte ou le pH utilisé pour déterminer la mobilité.
Enfin, un autre facteur qui affecte de manière significative l'électrophorèse est la température, ceci est important car le passage d'un courant électrique produira de la chaleur par effet Joule et ceci est directement proportionnel à la différence de potentiel et à la résistance. Par conséquent, il est nécessaire de contrôler strictement la température afin qu'elle n'affecte pas l'échantillon en le dénaturant.
Synonymes, antonymes
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En rapport avec "électrophorèse"
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