Contre-colorant

Définition

Un contre-colorant est un colorant utilisé pour créer un contraste lors d'une coloration différentielle. Le principe utilisé est le même que pour la contre-illumination. Il existe des contre-colorants primaires et des secondaires, par exemple pour mettre en évidence la coloration cytoplasmique d'une cellule.

Le contre-colorant est un colorant supplémentaire utilisé dans un échantillon de microscopie pour produire un fond contrasté ou pour faire plus clairement la distinction entre différents types de tissus.

Contre-colorer consiste à traiter (un spécimen) avec un contre-colorant.

⭐ En général, les contre-colorants sont conçus pour fournir un contraste du noyau avec l'immunocoloration cytoplasmique et le tissu environnant.

Les contre-colorants donnent une impression globale de la morphologie du tissu et peuvent être nucléaires ou cytoplasmiques, le plus souvent les premiers. Ils ne sont pas essentiels et leur utilisation est un choix individuel. Dans les sections où l'étiquetage devrait être absent, comme avec la dystrophine dans le DMD (le plus grand gène humain connu) ou un muscle mature sans isoformes de myosine immatures, une contre-coloration nucléaire peut être utile. Dans la dystrophie musculaire d'Emery-Dreifuss, l'absence d'émerine des noyaux à l'aide d'un système de détection à la peroxydase est plus facile à évaluer sans contre-coloration. Avec la fluorescence, cependant, une contre-coloration nucléaire à une longueur d'onde différente de celle utilisée pour détecter l'émerine peut être utile pour montrer où se trouvent les noyaux. Le choix de la contre-coloration dépend de la couleur du produit final ou du fluorochrome. L'hématoxyline et le vert de méthyle sont des contre-colorants nucléaires courants utilisés après la peroxydase. Si trop d'hématoxyline est présente, cela peut donner une délimitation pâle du sarcolemme et une attention particulière est alors nécessaire pour évaluer tout niveau très faible de protéines de sarcolemme. Par exemple, lors de l'évaluation de la dystrophine dans des coupes marquées à la peroxydase de cas de DMD, les faibles niveaux de transcrits mineurs peuvent être obscurcis ou de faibles niveaux de classe I du complexe majeur d'histocompatibilité (CMH) du sarcolemme peuvent être difficiles à identifier si la contre-coloration à l'hématoxyline est trop forte. La fluorescence est alors un avantage, car les faibles niveaux sont visibles sur le fond sombre. Pour la fluorescence, les contre-colorants nucléaires les plus couramment utilisés sont le 4′6-diamidino-2-phénylindole-2HCl (DAPI) (1 μg/mL), le colorant Hoechst (10 μg/mL), tous deux bleus sous lumière ultraviolette, ou l'éthidium bromure (1 μg/mL) ou TOTO, qui sont rouges. Des supports contenant une contre-coloration sont également disponibles dans le commerce.

Le choix du support est également déterminé par le marqueur de visualisation. Les sections marquées avec des enzymes telles que la peroxydase peuvent être déshydratées dans des alcools gradués, nettoyées et montées dans des résines synthétiques. Les marqueurs fluorescents nécessitent des supports aqueux et plusieurs commerciaux contiennent des agents anti-décoloration. Si un support à base de glycérol est utilisé, qui ne sèche pas, la lamelle doit être scellée et maintenue en place par du Vernis à ongles.

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