Immunoessai

Définition

Un immunoessai consiste en toute technique qui utilise la réaction antigène-anticorps pour la détection et la quantification d'antigènes, d'anticorps ou de substances voisines. Les immunoessais sont des tests rapides et précis qui peuvent être utilisés sur site et en laboratoire pour détecter des molécules spécifiques.

Plusieurs types d'immunoessais :

Les immunoessais sont des tests qui détectent la présence d'une molécule spécifique dans un échantillon en utilisant des réactions de liaison anticorps-antigène. Les dosages immunologiques sont disponibles dans une gamme de formats et peuvent être utilisés pour évaluer la maladie, suivre les protéines et détecter la contamination environnementale.

Explications

Depuis plus de 40 ans, les dosages immunologiques sont utilisés dans les hôpitaux, la médecine de laboratoire et la recherche pour améliorer la santé et le bien-être des humains et des animaux. Les informations obtenues par les tests d'immunoanalyse clinique ont raccourci les séjours à l'hôpital et diminué la gravité de la maladie en identifiant et en évaluant la progression de la maladie, conduisant ainsi à de meilleurs choix thérapeutiques.

Dans la recherche en sciences de la vie (SVT), les dosages immunologiques sont utilisés dans l'étude des systèmes biologiques en suivant différentes protéines, hormones et anticorps. Dans l'industrie, les dosages immunologiques sont utilisés pour détecter les contaminants dans les aliments et l'eau, et dans le contrôle de la qualité pour surveiller des molécules spécifiques utilisées pendant le traitement du produit.

Qu'est-ce qu'un dosage immunologique ou ELISA ?

Les dosages immunologiques reposent sur la capacité inhérente d'un anticorps à se lier à la structure spécifique d'une molécule.

Les anticorps sont des protéines générées par les animaux en réponse à l'invasion d'une molécule étrangère (antigène) dans le corps. Les anticorps se trouvent dans le sang et les liquides tissulaires et se lient à l'antigène chaque fois qu'il est rencontré. Étant donné que les anticorps sont développés pour la structure tridimensionnelle spécifique d'un antigène ou d'un analyte, ils sont hautement spécifiques et se lieront uniquement à cette structure. Une fois purifiés du sang, les anticorps monoclonaux et polyclonaux sont des réactifs de test idéaux pour détecter et surveiller des molécules cibles spécifiques avec des interférences limitées d'autres substances.

Quatre formats ELISA typiques sont : tests sandwich monoclonaux-polyclonaux, tests d'inhibition compétitive, tests immunologiques antigène-down et tests rapides.

Test immunologique en sandwich monoclonal-polyclonal

Dans un dosage immunologique typique en sandwich sur plaque de microtitration, un anticorps monoclonal est adsorbé sur une plaque de microtitrage en plastique.

Lorsque l'échantillon de test est ajouté à la plaque, l'anticorps sur la plaque se lie à l'antigène cible de l'échantillon et le retient dans la plaque. Lorsqu'un anticorps polyclonal est ajouté à l'étape suivante, il se lie également à l'antigène cible (déjà lié à l'anticorps monoclonal sur la plaque), formant ainsi un "sandwich" d'antigène entre les deux anticorps différents.

Test immunologique antigène

Dans un dosage immunologique anti-antigène, l'analyte est enduit sur une plaque de microtitration à 96 puits (plutôt qu'un anticorps) et utilisé pour lier les anticorps trouvés dans un échantillon. Lorsque l'échantillon est ajouté (tel que du sérum humain), l'antigène sur la plaque est lié par des anticorps (IgE par exemple) de l'échantillon, qui sont ensuite retenus dans le puits.

Un anticorps spécifique d'espèce (anti-IgE humaine par exemple) marqué avec HRP est ensuite ajouté, qui se lie à l'anticorps lié à l'antigène sur la plaque. Plus le signal est élevé, plus il y a d'anticorps dans l'échantillon. Les dosages d'antigène peuvent être configurés comme des tests rapides et sont souvent utilisés pour diagnostiquer les conditions allergiques - le sang d'un patient est régulièrement testé contre différents allergènes pour voir si la personne a des anticorps contre cet allergène.

Immunoessai d'inhibition compétitive

De nombreux dosages immunologiques sont structurés dans un format d'inhibition compétitif. Les tests d'inhibition compétitive sont souvent utilisés pour mesurer de petits analytes car les tests d'inhibition compétitive ne nécessitent que la liaison d'un anticorps plutôt que deux, comme dans les formats ELISA standard.

En raison de la forte probabilité qu'un encombrement stérique existe lorsque deux anticorps tentent de se lier à une petite molécule en même temps, un format d'analyse en sandwich peut ne pas être réalisable. Par conséquent, un test d'inhibition compétitive serait préférable.

Immunoessai rapide

En plus des plaques de microtitration, les dosages immunologiques sont également configurés comme des tests rapides, comme un test de grossesse à domicile. Comme les tests sur plaque de microtitrage, les tests rapides utilisent des anticorps pour réagir avec les antigènes et peuvent être développés sous forme de formats sandwich MoAb-PoAb, de formats d'inhibition compétitifs et de formats antigène-down.

Avec un test rapide, l'anticorps et les réactifs antigéniques sont liés à des membranes poreuses, qui réagissent avec des échantillons positifs tout en canalisant les liquides en excès vers une partie non réactive de la membrane.

Les immunoessais rapides se présentent généralement sous 2 configurations : un test à flux latéral où l'échantillon est simplement placé dans un puits et les résultats sont lus immédiatement; et un système à écoulement continu, qui nécessite de placer l'échantillon dans un puits, de laver le puits, puis d'ajouter finalement un conjugué analyte-or colloïdal et le résultat est lu après quelques minutes. Un échantillon est testé par bandelette ou cassette.

Parce que les tests rapides sont plus rapides que les dosages sur plaque de microtitration, nécessitent peu de traitement des échantillons, sont souvent moins chers et génèrent des réponses oui/non sans utiliser d'instrument, ils sont souvent utilisés sur le terrain par des personnes non-laboratoire testant des échantillons entiers.

Cependant, les dosages immunologiques rapides ne sont pas aussi sensibles ni ne peuvent être utilisés pour quantifier avec précision un analyte.

✅ L'autosurveillance de la glycémie par les diabétiques est considérée comme un test quantitatif rapide, cependant, la technologie de dosage immunologique n'est pas utilisée pour ces tests.

Tous les tests immunologiques rapides peuvent être convertis en un test sur plaque de microtitrage, mais tous les tests sur plaque de microtitrage ne peuvent pas être convertis à un test rapide.

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