Immunofluorescence
Définition
L'immunofluorescence est une technique d'immunomarquage (immunocoloration), qui utilise des anticorps, ou immunoglobulines, ainsi que des fluorochromes, liés chimiquement à une substance fluorescente pour démontrer la présence d'une molécule donnée.
C'est une technique qui présente à la fois des variantes quantitatives (par exemple FPIA) et qualitatives (immunocoloration des cellules pour observation par microscopie fluorescente).
Une immunofluorescence :
La spécificité, la cohérence et les conditions de test optimisées sont trois éléments clés qui contribuent à garantir des résultats de coloration par immunofluorescence (IF) fiables à chaque fois. Ici, l'immunofluorescence d'anticorps.
Explications
L'immunofluorescence, comme tous les dosages immunologiques, tire parti de la capacité des anticorps à se lier avec une spécificité élevée à une molécule cible spécifique; mais elle diffère des autres techniques immunohistochimiques en ce que ici le marqueur attaché à l'anticorps est une molécule fluorescente telle que, par exemple, l'isothiocyanate de fluorescéine. L'anticorps marqué est mis à réagir contre une préparation biologique et l'échantillon ainsi traité est exposé à une source lumineuse à ondes courtes (ultraviolette ou bleue) sélectionnée au moyen d'un monochromateur. Cette lumière à ondes courtes génère un phénomène de fluorescence dans la molécule marqueur qui à son tour émet de la lumière à une longueur d'onde plus longue (verte, jaune ou orange). Cette lumière émise peut être facilement quantifiée par photométrie ou, dans le cas de préparations histologiques, elle peut être observée au moyen d'un microscope à fluorescence. Dans le cas de l'utilisation de l'immunofluorescence comme méthode de coloration pour la microscopie optique, la fluorescence révèle la localisation au niveau cellulaire ou subcellulaire de la molécule cible.
L'immunofluorescence, en tant que technique de coloration, peut être utilisée dans des coupes de tissus, des lignées cellulaires cultivées, des cellules individuelles et des sécrétions contenant des cellules en suspension (par exemple des expectorations) afin d'analyser la présence et la distribution de protéines, de glucides et de petites molécules. à la fois d'origine biologique et non. Cette technique peut être utilisée en combinaison avec d'autres techniques de coloration fluorescente qui n'utilisent pas d'anticorps, comme le DAPI pour marquer l'ADN.
Il existe plusieurs modèles de microscopes qui peuvent être utilisés pour l'analyse de préparations histologiques marquées par immunofluorescence. Le plus simple de tous est le microscope à épifluorescence, bien que le microscope confocal soit également largement utilisé. Il est également possible d'utiliser différents types de techniques microscopiques à haute résolution.
L'immunofluorescence en tant que technique de quantification immunochimique peut être utilisée dans des échantillons d'origine biologique ainsi que dans des échantillons non biologiques, à condition qu'ils soient dans un milieu favorable à la liaison d'anticorps. En général, une solution de PBS (tampon phosphate salin) est utilisée comme milieu réactionnel. Un exemple de ce type de technique est le FPIA.
L'immunofluorescence primaire ou directe, également connue sous ses initiales IFD (immunofluorescence directe), utilise un anticorps unique lié chimiquement à un fluorochrome. L'anticorps reconnaît la molécule cible et s'y lie directement. Si la région où la molécule cible est déposée est utilisée comme technique de coloration immunohistochimique, elle peut être identifiée sous le microscope à fluorescence comme une zone claire. Cette technique présente certains avantages par rapport aux IFI (indirects). Il réduit le nombre d'étapes nécessaires, donc il est plus rapide et par contre il est moins sensible aux interférences dues à la réactivité croisée des anticorps ou à des réactions non spécifiques, qui tendent à augmenter le bruit de fond de la technique.
L'immunofluorescence secondaire ou indirecte (également connue sous son acronyme IFI) utilise deux anticorps; l'anticorps primaire est celui qui reconnaît et se lie à la molécule cible, tandis que l'anticorps secondaire qui est celui marqué avec le fluorophore, reconnaît le primaire et s'y lie. Cette technique est légèrement plus complexe que l'IFD, nécessite plus d'étapes et est plus susceptible de subir des interférences, mais en retour, elle est beaucoup plus flexible qu'une technique directe et parce qu'il est possible pour un anticorps primaire d'unir plus d'un anticorps secondaire, implique un effet d'amplification qui augmente également la sensibilité de la technique. Cette technique est possible, car les anticorps se composent de deux parties, une région variable (qui est celle qui reconnaît l'antigène) et une région constante (qui est celle reconnue par l'anticorps secondaire).
Synonymes, antonymes
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En rapport avec "immunofluorescence"
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