Phagémide

Définition

Un phagémide est un vecteur de clonage utilisé en biotechnologie, composé d'un plasmide auquel a été incorporée l'origine de réplication d'un phage filamenteux à ADN simple brin. Ainsi, le phagémide conserve toutes les utilités des plasmides mais a également la capacité de produire de l'ADN simple brin.

Les phagémides contiennent la région intergénique du phage filamenteux comprenant les origines de la synthèse des brins plus et moins et tous les autres éléments agissant en cis nécessaires à la synthèse de l'ADNss et à son conditionnement dans des virions.

Un phagémide :

Schéma du vecteur de clonage phagémide utilisé dans la technologie d'affichage de phage avec protéine d'enveloppe. Les phagémides (ou phasmides) sont des vecteurs dérivés de phages filamenteux contenant l'origine de réplication d'un plasmide.

Explications

Les vecteurs phagémides sont des outils indispensables dans la technologie de présentation de phages. De nombreux vecteurs phagémides ont été construits selon les différentes exigences et objectifs des expériences, ce qui a grandement favorisé les applications du phage "display". Cependant, ces vecteurs phagémides ne peuvent être utilisés que pour afficher une petite partie des protéines et ne peuvent pas répondre aux exigences de certains objectifs particuliers, tels que la surveillance en temps réel des protéines étrangères de type multiple affichées.

Les phagémides ne codent généralement pas ou un seul type de protéines d'enveloppe. D'autres protéines structurelles et fonctionnelles nécessaires pour accomplir le cycle de vie du phagémide sont fournies par le phage auxiliaire. De plus, d'autres éléments tels que des étiquettes moléculaires et des marqueurs sélectifs sont introduits dans les phagémides pour faciliter les opérations ultérieures, telles que la manipulation de gènes et la purification de protéines.

✅ La transduction est un outil couramment utilisé par les scientifiques pour introduire différentes séquences d'ADN d'intérêt dans une cellule bactérienne ou le génome d'un hôte. Pour ce faire, les scientifiques utilisent couramment des phagémides, un vecteur de clonage d'ADN qui contient à la fois des propriétés de bactériophage et de plasmide. Les phagémides sont emballés dans des particules de phage incompétentes pour la réplication avec l'aide d'un phage auxiliaire avant la transduction. La sélection d'anticorps recombinants, des technologies d'ingénierie des anticorps ont été développées et explorées pour obtenir les caractéristiques souhaitées des principaux candidats sélectionnés, telles qu'une affinité élevée, une faible immunogénicité, une fonctionnalité améliorée, une production de protéines améliorée, une stabilité améliorée, etc.

Structure et morphologie des phagémides

Les phagémides sont des vecteurs dérivés du phage Ff, contenant l'origine de réplication d'un plasmide. Les composants de base d'un phagémide comprennent principalement l'origine de réplication d'un plasmide, le marqueur sélectif, la région intergénique (région IG, contient généralement la séquence d'emballage et l'origine de réplication des brins moins et plus), un gène d'une protéine d'enveloppe de phage, restriction des sites de reconnaissance enzymatique, un promoteur et un segment d'ADN codant pour un peptide signal.

Stratégies de construction et caractéristiques des phagémides

À ce jour, de nombreuses stratégies et éléments génétiques ont été adoptés à différentes fins dans le développement de vecteurs phagémides. Dans la première application de vecteurs phagémides pour la présentation de phages, Bass et al. construit le phagémide phGH-M13gIII en utilisant le phage auxiliaire M13KO7 et le plasmide pBO473. Dans phGH-M13gIII, l'hormone de croissance humaine a été fusionnée au domaine carboxy-terminal de pIII tronqué.

Perspectives d'avenir

Sur la base de différentes applications et exigences, de nombreux vecteurs phagémides ont été construits non seulement pour cribler des protéines étrangères mais également pour détecter, purifier et préparer des protéines. Avec le développement de la technologie de présentation de phages, des vecteurs phagémides spécialisés ont été construits pour répondre à des exigences supplémentaires. Les copies de protéines étrangères attachées aux phages descendants, la longueur ou le poids moléculaire des peptides étrangers à afficher et la distribution des étrangers.

En rapport avec "phagémide"

• clonage

  

  Le clonage est une technique utilisée par les scientifiques pour créer des copies génétiques exactes d'êtres vivants.

• phasmide

  

  Chez les invertébrés, un phasmide est un organe sensoriel postérieur de certains Nématodes.

• plasmide

  

  Chez les procaryotes et quelques eucaryotes, le plasmide se présente sous forme de courts fragments d'acide nucléique capables de se multiplier indépendamment...

• réplication

  

  Une réplication est l'ensemble des processus qui permettent de reproduire à l'identique un ADN.