ADN complémentaire
Définition
L'ADN complémentaire (abrégé en ADNc) est une copie d'ADN d'un ARN messager (ARNm) produite par la transcriptase inverse, car une ADN polymérase peut utiliser l'ADN ou l'ARN comme matrice. L'ADNc est un ARNm retranscrit. Il ne contient pas d'introns ou de séquences de signaux que l'on trouve souvent dans un gène.
La génération d'un ADN complémentaire (ADNc) :
La génération d'un ADN complémentaire (ADNc) est réalisée à partir d'un gène eucaryote isolé.
Explications
L'ADN complémentaire (ADNc) est synthétisé en laboratoire à partir de l'ARN messager. L'ADNc n'est pas de l'ADN génomique, car le transcrit de l'ARN génomique a été traité et il manque de promoteurs de signalisation cellulaire et d'introns.
L'ADNc est utilisé pour créer des marqueurs de séquence exprimée (EST). L'ADNc est également utilisé pour les sondes dans un microréseau à ADN. Il peut être stocké en grande quantité dans des bibliothèques d'ADNc. Après transcription inverse, l'ADN complémentaire peut être amplifié par PCR.
L'enzyme transcriptase inverse est utilisée pour synthétiser l'ADN double brin qui est une copie complémentaire de l'ARNm. L'ajout de séquences de liaison à l'extrémité de cet ADN, qui contiennent le site de restriction, suivi d'un traitement avec une enzyme de restriction, produit une préparation d'ADNc avec des extrémités cohésives prêtes à être insérées dans un vecteur. Une préparation d'ADNc représente les gènes qui étaient activement exprimés dans une cellule, un organe ou un organisme entier au moment de la récolte et est appelée une bibliothèque d'ADNc.
Le fait que le terme ADNc puisse être traduit de deux manières est dû au fait que les chercheurs utilisent le terme un peu bâclé. À l'origine, il ne s'agissait que d'ADN complémentaire, d'ADN complémentaire au code des gènes, mais plus tard, cette utilisation a été quelque peu diluée.
L'ADNc est principalement utilisé pour exprimer les gènes eucaryotes chez les procaryotes, car les procaryotes n'ont pas la capacité d'épisser l'ARNm pour la traduction. L'ADNc est utilisé dans la technologie de l'ADN recombinant. L'ADNc d'un eucaryote peut être inséré dans un plasmide d'une bactérie, après quoi la bactérie prend en charge la propriété eucaryote, telle que la production d'insuline.
Sonde d'ADNc
Une sonde d'ADNc peut être générée à partir d'un ARNm spécifique. L'ARNm, codant pour une protéine spécifique, est une matrice. Par l'action de la transcriptase inverse et de l'ADN polymérase, un ADNc est formé qui peut être utilisé comme sonde pour s'hybrider avec une séquence de gène spécifique.
Généralement, la sonde d'ADNc sera marquée, plus récemment, avec une étiquette fluorescente qui n'interfère pas avec la réaction d'hybridation. Un tel ADNc peut être utilisé pour sonder une bibliothèque d'ADNc pour une séquence complémentaire, soit pour trouver une séquence plus longue contenant plus d'informations, soit pour rechercher une région codante complète du gène.
Hybridation sur puce à ADNc
L'hybridation d'ADNc sur un microréseau est similaire à d'autres procédures d'hybridation, telles que les Southern Blot et Northern Blot. Toutes ces techniques reposent sur la complémentarité des bases d'acides nucléiques. Lorsque deux brins complémentaires d'ADN ou d'ARN sont côte à côte, les bases correspondent à leur complément, c'est-à-dire la thymine (ou l'uracile) avec l'adénine et la guanine avec la cytosine. Sur une puce à ADN, l'hybridation est affectée par les mêmes paramètres que dans ces autres techniques.
Les puces à ADNc sont moins sujettes aux problèmes rencontrés dans les puces à oligonucléotides. Les ADNc sont à double brin, de sorte que les structures secondaires telles que les structures en épingles à cheveux (structure tige-boucle) sont moins susceptibles de poser problème. Au cours d'une réaction d'hybridation, les puces à ADNc doivent être dénaturées par la chaleur ou des produits chimiques, ce qui rend les sondes monocaténaires. Ensuite, les échantillons d'ARN simple brin sont autorisés à s'hybrider sur la lame dans des conditions qui favorisent le duplex ARN : ADNc sans aucun mésappariement.
Préparation Slot-Blot (clones d'ADNc)
Des clones d'ADNc de plasmide correspondant à diverses séquences d'ARNm candidates sont préparés en utilisant des procédures à grande échelle (maxipréparation). Chaque clone d'ADNc est linéarisé à l'aide de l'enzyme de restriction appropriée et stocké jusqu'à utilisation ultérieure dans un tampon 10 SSC. Avant le chargement sur slot-blot, l'ADNc linéarisé dans 10 SSC est dénaturé par la chaleur (85 °C pendant 5 min) pour éliminer la structure secondaire et 1 μg d'ADN total est chargé par slot sous vide. Les ADNc sont ensuite fixés sur les blots en les cuisant pendant 4h à 80 °C sous vide.
Synonymes, antonymes
2 synonymes (sens proche) de "aDN complémentaire" :
- ADNc
- ARNm retranscrit
0 antonyme (sens contraire).
Les mots ou les expressions apparentés à ADN COMPLÉMENTAIRE sont des termes qui sont directement liés les uns aux autres par leur signification, générale ou spécifique.
L'expression ADN COMPLEMENTAIRE est dans la page 2 des mots en A du lexique du dictionnaire.
Mots en A à proximité
adjuvant adlittoral ADN ADN antisens ADN codant ADN complémentaireADN de transfert ADN environnemental ADN génomique ADN ligase ADN mitochondrial
En rapport avec "ADN complémentaire"
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