Pyroséquençage
Définition
Le pyroséquençage est une technologie de séquençage de l'ADN sans gel et par synthèse, qui consiste à obtenir des informations génétiques en synthétisant le brin d'ADN allongé en utilisant le brin complémentaire comme matrice.
Le pyroséquençage est une méthode de séquençage basée sur la réplication dans laquelle l'ajout du nucléotide correct à l'ADN matrice immobilisé est signalé par une réaction photométriquement détectable.
Exemple de pyroséquençage :
Processus de préparation d'une bibliothèque d'ADN par pyroséquençage. (A) Fragmentation et dénaturation de l'ADN séquencé ainsi que des adaptateurs supplémentaires et de la biotine. fixation individuelle de l'ADNsb sur des billes recouvertes de streptavidine. (B) emPCR et chargement des réactifs sur la plaque de réaction pour le pyroséquençage.
Explications
En 1993, l'un des premiers séquenceurs d'ADN de deuxième génération est apparu, lorsque le Dr Bertil Pettersson, le Dr Mathias Uhlen et Pal Nyren ont introduit le pyroséquençage, souvent décrit comme le pionnier du séquençage de l'ADN de nouvelle génération.
Le pyroséquençage est une alternative intéressante au séquençage conventionnel au bisulfite. Le séquençage au bisulfite est la méthode de traitement des échantillons d'ADN avec du bisulfite de sodium pour déterminer son modèle de méthylation.
Le pyroséquençage détecte la luminescence issue de la libération de pyrophosphate lors de l'incorporation du nucléotide dans le brin complémentaire. Les études de pyroséquençage nécessitent également de coupler le traitement au bisulfite de l'ADN génomique avec l'amplification par PCR de la séquence cible, mais l'avantage du pyroséquençage est que des données quantitatives sur la méthylation de l'ADN peuvent être obtenues à partir du séquençage direct des produits de PCR sans nécessiter de clonage dans des vecteurs d'expression bactériens et de séquençage d'un un grand nombre de clones.
D'autre part, la qualité des données diminue avec la distance entre le CpG et l'extrémité 3′ de l'amorce directe, ce qui limite le nombre de bases pouvant être analysées dans une seule réaction de séquençage.
Pour créer une bibliothèque d'ADN, le séquençage commence par la fragmentation et la dénaturation de l'ADN séquencé pour former des fragments d'ADN simple brin (ADNsb) d'une longueur de 300 à 500 nucléotides, où des séquences adaptatrices sont ajoutées aux deux extrémités.
Synonymes, antonymes
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Mots en P à proximité
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En rapport avec "pyroséquençage"
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