Microscopie photonique
Définition
La microscopie photonique est une technique d'observation des objets au moyen de l'utilisation d'un microscope dans lequel un faisceau de photons (de lumière) éclaire l'objet.
La microscopie multiphotonique à champ large fait référence à une technique d'imagerie optique non linéaire conçue pour l'imagerie ultrarapide dans laquelle une grande surface de l'objet est éclairée et imagée sans balayage. Des intensités élevées sont nécessaires pour induire des processus optiques non linéaires tels que la fluorescence à deux photons ou la génération de second harmonique. Lors du balayage de microscopes multiphotoniques, les intensités élevées sont obtenues en focalisant étroitement la lumière, et l'image est obtenue par balayage de l'échantillon.
Comparaison entre microscopie photonique et électronique :
Schéma des différences entre la microscopie photonique (microscope optique) et la microscopie électronique.
Explications
En microscopie multiphotonique à champ large, les intensités élevées sont mieux obtenues en utilisant une source laser pulsée amplifiée optiquement pour atteindre un large champ de vision (environ 100 μm).
L'image dans ce cas est obtenue comme une seule image avec un CCD sans besoin de balayage, rendant la technique particulièrement utile pour visualiser des processus dynamiques simultanément à travers l'objet d'intérêt. Avec la microscopie multiphotonique à grand champ, la fréquence de trame peut être augmentée jusqu'à 1 000 fois par rapport à la microscopie à balayage multiphotonique.
La microscopie par excitation à deux photons est une technique d'imagerie par fluorescence qui permet l'imagerie de tissus vivants jusqu'à environ un millimètre de profondeur. Il diffère de la microscopie à fluorescence traditionnelle, dans laquelle la longueur d'onde d'excitation est plus courte que la longueur d'onde d'émission, car les longueurs d'onde des deux photons excitants sont plus longues que la longueur d'onde de la lumière émise résultante. La microscopie d'excitation à deux photons utilise typiquement une lumière d'excitation proche de l'infrarouge qui peut également exciter des colorants fluorescents. Cependant, pour chaque excitation, deux photons de lumière infrarouge sont absorbés. L'utilisation de la lumière infrarouge minimise la diffusion dans le tissu. En raison de l'absorption multiphotonique, le signal de fond est fortement supprimé. Les deux effets conduisent à une profondeur de pénétration accrue pour ces microscopes. L'excitation à deux photons peut être une alternative supérieure à la microscopie confocale en raison de sa pénétration plus profonde dans les tissus, de la détection efficace de la lumière et du photoblanchiment réduit.
Synonymes, antonymes
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